本文件定义了生物技术领域细胞计数相关术语,描述了悬液中的细胞计数(通常是细胞浓度)和黏附在基质上的细胞计数(通常是细胞面积密度),提供了细胞计数方法(包括总数和分类计数,直接计数和间接计数)的一般原则,以及方法的选择和测量过程的关键注意事项,规定了数据处理、分析和报告的要求。本文件适用于所有细胞类型的计数,包括哺乳动物和非哺乳动物(如细菌、酵母)细胞计数。本文件不适用于组织切片或生物材料基质中的细胞计数。现有不同领域/特定应用场景的细胞计数相关国际和国家标准。如适用,使用者操作时可以在其范围(特定的测量技术和/或应用场景)内参考现有标准。
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本文件规定了核酸靶序列定量方法的性能评估和质量保证的通用要求。本文件适用于数字PCR(dPCR)或实时定量PCR(qPCR)扩增技术对DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)靶序列的定量测定。适用的靶序列核酸分子,包括双链DNA(dsDNA),如基因组DNA(gDNA)和质粒DNA;单链DNA(ssDNA),互补DNA(cDNA),单链RNA(ssRNA)包括核糖体RNA(rRNA)、信使RNA(mRNA);双链RNA,包括长链和短链非编码RNA[微小RNA(miRNA)和小干扰RNA(siRNA)等]。本文件适用于生物来源的核酸(如病毒、原核细胞和真核细胞)、无细胞生物液体样本(如血浆或细胞基质);体外非生物来源的核酸[如寡核苷酸、合成的基因片段和体外转录(IVT)的RNA]中提取的核酸。本文件不适用于过短的DNA寡核苷酸(<50碱基)的定量。本文件包含:--分析设计,包括定量策略(qPCR标准曲线法、dPCR分子计数法、qPCR相对定量法、dPCR比值定量法)和使用控制;--总核酸质量浓度定量和核酸样本质量控制,包括核酸质量的评估(纯度和完整性);--PCR试验设计、优化,生物信息学和体外特异性测试;--数据质量控制和分析,包括验收标准、阈值设置以及归一化方法;--根据qPCR/dPCR具体要求的方法验证(精密度、线性、定量限、检出限、正确度和稳健性);--计量溯源性建立和测量不确定度评估的方法。本文件不对生物材料的抽样或生物样本的处理过程(如采集、保存、运输、储存、处理和核酸提取)提出要求或验收标准。也不对特殊应用(如可能出现特殊基质问题的食品或者临床应用领域)提出要求和验收标准。
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本文件规定了用分子马达法、近红外免疫层析法和目标区域测序法快速测定微生物的方法。本文件中第一法--分子马达法适用于食品和生活饮用水中单核细胞增生李斯特氏菌(L. monocytogenes)、副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、沙门氏菌(Salmonella)、阪崎克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)(Cronobacter sakazakii)、志贺氏菌(Shigella)、甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)的快速测定;第二法--近红外免疫层析法适用于食品和生活饮用水中单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、沙门氏菌、轮状病毒(Rotavirus)、诺如病毒(Norovirus)、甲型肝炎病毒的快速测定;第三法--目标区域测序法适用于食品和生活饮用水中沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶耳森氏菌(Yersinia enterocolitica)、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)、单核细胞增生李斯特氏菌、肠出血性大肠杆菌O157:H7(Enterohemorrhagic E. coli O157 )、霍乱弧菌、阪崎克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)、创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的快速测定。
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