【团体标准】 生物活性玻璃体外矿化测试方法

1试验试剂和测试器具1.1试验试剂试验所用试剂有：a）NaCl（分析纯）；b）NaHCO3（分析纯）；c）KCl（分析纯）；d）KHPO4·3H20（分析纯）；e）MgCl2·6H20（分析纯）；f）盐酸溶液（分析纯）浓度1mol/L；g）CaCl2（分析纯）；h）Na2SO4（分析纯）；i）Tris（分析纯）；j）去离子水。1.2测试器具试验所用测试器有∶a）集热式磁力搅拌器；b）pH计；c）电子分析天平∶精度0.001g；d）烧杯2L；e）量筒50mL、1L；f）容量瓶1L；g）聚四氟乙烯瓶∶1L。2两种常用的体外矿化液的配制2.1Tris-HCl缓冲液2.1.1所需试剂Tris-HCl缓冲液配制所需试剂如下：a）去离子水：700mL；b）Tris:(6.00±0.50)g;c）盐酸溶液∶35mL，浓度为1mol/L。2.1.2配制步骤2.1.2.1搅拌状态下将35mL，浓度为1mol/L的盐酸溶液加入到700mL去离子水中。2.1.2.2缓慢加入Tris，使其pH不超过7.45，并调节pH值为7.40。2.1.2.3将调整好pH的溶液定容至1000mL，并转移至干净、内表面光滑的聚四氟乙烯瓶中，置于4℃冰箱冷藏备用。注∶使用时，应检查并保证Tris-HCl溶液处于澄清状态，若浑浊则不能再使用，应重新配制，并且使用有效期为30天。2.2模拟体液2.2.1所需试剂配制模拟体液所需试剂及用量见表1。表1配制模拟体液所需试剂及用量加入次序试剂加入量1NaCl8.035g2NaHCO30.355g3KCl0.225g4KHPO4·3H2O0.231g5MgCl2·6H200.311g6盐酸溶液a39mL7CaCl20.292g8Na2SO40.072g9Tris6.118g10盐酸溶液0mL~5mLa“盐酸溶液浓度为1mol/L。2.2.2配制步骤2.2.2.1向烧杯中加入700mL去离子水，搅拌并调节水温至（36.5±1.5）℃。2.2.2.2按表1中所列顺序在（36.5±1.5）℃下逐个溶解试剂1~8。2.2.2.3溶液温度恒定在（36.5±1.5）℃，称取试剂9后，少量多次的缓慢加入至混合溶液中，搅拌至完全溶解。2.2.2.4在（36.5±1.5）℃的条件下，保持搅拌并逐滴加入试剂10，精确调整pH值至7.40。2.2.2.5将调整好pH的溶液定容至1000mL，并转移至干净、内表面光滑的聚四氟乙烯瓶中，置于4℃~8℃冰箱冷藏备用。注∶配制过程中不能同时溶解多个试剂，下一个试剂必须在前一试剂完全溶解之后加入。称量吸湿性试剂动作要尽量快，整个配制过程需要确保溶液无色、透明、容器表面无沉淀出现，如果过程中产生沉淀，倒去溶液洗净器具重新配制。3材料的体外矿化3.1密质薄片材料3.1.1对于密质薄片材料，测出样品尺寸并计算样品表面积。应用式（1）计算出体外矿化液用量∶Vs=Sa/10……………(1)式中:Vs——体外矿化液的体积，单位为毫升（mL）；Sa————样品的表面积，单位为平方毫米（mm2）。3.1.2按照这个比例，得到样品的表面积和矿化液的比例为10mm2/mL。3.1.3将计算好的体外矿化液加入到聚四氟乙烯瓶中，预热至37℃，放入样品并置于37℃、100rpm的恒温摇床中震荡。在规定时间取出样品，样品以去离子水和丙酮交替淋洗，之后置于电热恒温干燥箱中105℃干燥24h，得到矿化后的样品进行后续测试。注∶若有需要，可收集上清液用于检测矿化相关离子的浓度变化。3.2粉体材料3.2.1对于粉体材料，按照每克粉体对应100mL体外矿化液的用量。3.2.2将计算好的体外矿化液加入到聚四氟乙烯瓶或玻璃锥形瓶中，封口，预热至37℃，放入样品并置于37℃、100rpm的恒温摇床中震荡。在规定时间取出样品，样品以去离子水和丙酮交替淋洗，之后置于电热恒温干燥箱中105℃干燥24h，得到矿化后的样品进行后续测试。注∶若有需要，可收集上清液用于检测矿化相关离子的浓度变化。4样品测试与表征4.1扫描电子显微镜分析按照JY/T0584进行，对不同反应时间的样品表面及其矿化产物形貌进行观察，有针状或者叶片状钙磷矿化产物生成。通过比较不同浸泡时间的扫描电镜图，判断矿化产物HCA的生成量是否不断增加。4.2红外光谱分析按照GB/T6040进行，观察浸泡不同时间的矿化产物的特征吸收峰，并用来判断最终是否有低结晶度的HCA形成，并定性分析其生成。4.3X射线衍射分析按照《中华人民共和国药典》（2020年版四部）通则中0451的X射线衍射法进行，对不同反应时间矿化产物进行分析，结合其特征衍射峰：JCPDS：2θ=25.9°（002），31.8°（211），39.8°（310），46.7°（222），49.5°（213），53.1°（004）进一步明确矿化产物种类以及结晶程度。