【团体标准】 兽药制剂用金银花提取物

本标准起草过程主要参考《中华人民共和国兽药典》二部及《兽药质量标准》（2017年版）中药卷银黄可溶性粉，本标准规定了《兽药制剂用金银花提取物》的术语和定义、技术指标、抽样、试验方法、检验规则、包装、运输、贮存和保质期。1、标准名称：“兽药制剂用金银花提取物”。2、范围：本标准规定了兽药制剂用金银花提取物的术语和定义、技术指标、抽样、试验方法、检验规则、包装、运输、贮存和保质期。本标准适用于兽药银黄可溶性粉中间产品金银花提取物，也适用于其他提取工艺相同的金银花提取物。3、规范性引用文件：本标准引用和参考了最新版的国内先进标准，以充分保证本标准条款的可依性和可行性。4、技术指标：本标准确定了兽药制剂用金银花提取物的技术指标，应符合表1的规定。表1技术指标绿原酸鉴别薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。水分，%≤5.0溶解性符合规定绿原酸（C16H18O9)，mg/g≥34.05、试验方法：本标准试验方法参照并引用《中华人民共和国兽药典》二部及参照《兽药质量标准》（2017年版）中药卷银黄可溶性粉。5.1性状将本品放置在白瓷盘内，在自然光下，用肉眼观察评定本品的外观性状，经不同厂家多批次的性状考察，为浅黄色至棕黄色的粉末，色泽均匀。5.2绿原酸鉴别参照《兽药质量标准》（2017年版）中药卷银黄可溶性粉【鉴别】制定了附录A（兽药制剂用金银花提取物中绿原酸的鉴别方法）。银黄可溶性粉【鉴别】项中取样量为1g，相当于中间产品兽药制剂用金银花提取物50mg，所以确定取样量为50（±5）mg。银黄可溶性粉【鉴别】项同时对黄芩苷和绿原酸两种成分进行鉴别，用了黄芩苷和绿原酸两种对照品，本标准只对绿原酸进行鉴别，所以只取绿原酸对照品。其他如试剂或材料、仪器设备、样品提取、鉴别法都参照《兽药质量标准》（2017年版）中药卷银黄可溶性粉【鉴别】执行。5.2.1原理试料中的绿原酸用75％乙醇提取，用薄层色谱法进行鉴别。5.2.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为符合GB/T6682规定的三级水。5.2.2.1乙醇。5.2.2.2醋酸。5.2.2.375％乙醇：取乙醇79mL，用水稀释至100mL。5.2.2.4绿原酸标准工作液（0.3mg/mL):精密称取绿原酸对照品（供薄层色谱鉴别及含量测定用）3mg，置10mL棕色容量瓶中，用75％乙醇（A.2.3）溶解并稀释至刻度，摇匀。4℃保存。5.2.2.5聚酰胺薄膜。5.2.3仪器设备5.2.3.1分析天平：感量0.0001g，0.00001g。5.2.3.2棕色容量瓶。5.2.3.4层析缸。5.2.3.5三用紫外分析仪。5.2.4样品兽药制剂用金银花提取物装入磨口瓶中作为试料检测。5.2.5试验步骤5.2.5.1提取取试料50（±5）mg，置10mL棕色容量瓶中，用75％乙醇（A.2.3）9mL溶解，作为试样溶液。5.2.5.2鉴别法分别吸取绿原酸标准工作液（A.2.4）与试样溶液（A.5.1）各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸（A.2.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置三用紫外分析仪（365nm）下检视。5.2.6结果判定薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图1。图1绿原酸鉴别色谱图1.绿原酸对照品2.样品5.3水分按《中华人民共和国兽药典》二部附录0832水分测定法（第三法）中的规定执行。参照银黄可溶性粉【鉴别】水分的要求，确定了兽药制剂用金银花提取物的水分不得过5.0％，即≤5.0％。5.4溶解性溶解性是可溶性粉剂检查项的一个重要指标，作为银黄可溶性粉的中间产品，将溶解性列入金银花提取物的技术指标之一，具体按《中华人民共和国兽药典》二部附录0114可溶性粉中的规定执行。5.4含量测定参照《兽药质量标准》（2017年版）中药卷银黄可溶性粉【含量测定】项，制定了附录B（兽药制剂用金银花提取物中绿原酸的定量测定方法）。银黄可溶性粉【鉴别】项中取样量为1g，相当于中间产品兽药制剂用金银花提取物50mg，所以确定取样量为50（±5）mg。其他如试剂或材料、仪器设备、液相参考条件、测定法都参照《兽药质量标准》（2017年版）中药卷银黄可溶性粉【含量测定】执行。5.4.1原理样品中的绿原酸用水提取，用高效液相色谱法测定，外标法定量。5.4.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为符合GB/T6682规定的一级水。5.4.2.1甲醇：色谱纯。5.4.2.2乙腈：色谱纯。5.4.2.3磷酸。5.4.2.462％甲醇：取甲醇62mL，用水稀释至100mL。5.4..2.5绿原酸（CAS327-97-9，含量≥96.3％）5.4.2.60.4％磷酸溶液：取磷酸4.0mL，用水稀释至1000mL。5.4.2.7绿原酸标准储备液（100μg/mL):精密称取绿原酸对照品（供薄层色谱鉴别及含量测定用）10mg，置100mL棕色容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。2℃～8℃保存，有效期3个月。5.4.2.8绿原酸标准工作液（10μg/mL):精密量取100μg/mL的绿原酸标准储备液1mL，置10mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。4℃保存。5.4.2.9微孔滤膜：0.45μm，有机相、水相。5.4.3仪器设备5.4.3.1分析天平：感量0.0001g，0.00001g。5.4.3.2高效液相色谱仪（配紫外检测器）。5.4.3.4棕色容量瓶。5.4.3.5以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6mm×250mm，5μm）的色谱柱；或性能相当者。5.4.4样品兽药制剂用金银花提取物装入磨口瓶中作为试料检测。5.4.5试验步骤5.4.5.1提取平行做两份试验。精密称取试料50（±0.5）mg，置50mL棕色容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置10mL棕色容量瓶中，用62％甲醇（B.2.4）稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为试样溶液。5.4.5.2液相色谱参考条件流动相：A：0.4％磷酸溶液（B.2.6），B：乙腈（B.2.2），梯度洗脱，洗脱程序见表1。检测波长：327nm。流速：1.0mL/min。进样量：20μL。表1梯度洗脱程序时间，min流速，mL/min流动相A，%流动相B，%0～141.0881214～171.088→7312→2717～271.0732727～301.073→8827→1230～351.088125.4.5.3定量测定分别精密吸取绿原酸标准工作液（B.2.8）、试样溶液（B.5.1）与不加试样的空白溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录绿原酸对照品、样品及空白对照的色谱图（见图2-4），以色谱峰峰面积的响应值，用外标法进行定量测定。图2绿原酸对照品高效液相色谱图图3金银花提取物样品高效液相色谱图图4空白样品高效液相色谱图测定结果表明：在绿原酸峰相应的保留时间处，空白样品无干扰。5.4.6计算公式试样中绿原酸的含量以质量分数X计，数值以%表示，按式（1）计算：…………………………………（1）式中：A对---对照品峰面积；A样---样品的峰面积；M对---对照品的质量，单位为毫克（mg）；M样---样品的质量，单位为毫克（mg）；C对---对照品含量；V对---对照品的稀释体积，单位毫升（mL）；V样---样品的稀释体积，单位为毫升（mL）；测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。5.4.7试验数据与结果绿原酸对照品来源：中国兽医药品监察所批号：Z0261809含量：97.0%对照品①②称样量（mg）10.5210.57峰面积606612样品①②称样量（mg）49.6649.58峰面积26512691含量（mg/g）44.9445.46平均值（mg/g）45.2相对标准偏差（%）0.85.4.8精密度两个平行测定结果的相对偏差不大于2％。6、检验规则：本条款规定了检验方式和判定规则。7、包装、运输、贮存和保质期：包装材料应符合《中华人民共和国兽药典》二部附录9032药包材通用要求指导原则及农业农村部的规定，均应无毒、洁净，与内容物不发生化学反应，并不得影响内容物的质量。整洁、卫生、无破损。运输设备应清洁卫生、不得与有毒、有害、有腐蚀性和含有异味的物品混装，应避免受潮、暴晒。本品为固体粉末，需阴凉干燥处保存，所以确定贮存条件为：贮存在阴凉、通风、干燥、清洁的仓库内，不得与有毒、有害、有腐蚀性和含有异味的物品放在一起。考虑不同的生产企业，其生产工艺及生产设备等有所不同，对产品的有效期的规定时间也不尽相同，所以规定有保质期为：在符合运输、贮存条件的情况下，原包装产品的保质期与标签中标明的保质期一致。