【团体标准】 人羊膜间充质干细胞库

8技术要求8.1原材料和辅料8.1.1应符合T/CSCB0009-2022要求。8.1.2应建立供者细胞采集的供者评估与筛选标准、采集方法、运输标准和交接标准，保证供者和细胞的安全。8.1.3供体应筛查HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV和TP，并记录结果。8.2采集与培养方法8.2.1样本采集8.2.1.1人羊膜组织样本采集应由专业的医护人员完成。8.2.1.2羊膜的采集场所应达到Ⅲ级洁净手术室要求。8.2.2样本运输8.2.2.1样本运输人员应是经过培训合格的专门人员。8.2.2.2羊膜样本的运输温度为2℃～8℃，样本离体时间不宜超过24h。8.2.2.3样本运输过程应受控并建立记录档案。8.2.3样本接收8.2.3.1接收样本时应先检查容器外观有无破损，并记录。8.2.3.2检查《样本采集信息记录表》的信息是否齐全，确认无误后对样本进行唯一性标识。8.2.3.3用75%的医用酒精对容器外表面进行消毒，依据样本接收标准，对检测达标后的样本进行接收；检测不达标的样本拒收后进行销毁，并做好相应记录。8.2.4分离及提取人羊膜组织样本剪至片状，用胰酶消化法去除羊膜上皮细胞。然后将人羊膜组织剪碎，用胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞。进行人羊膜间充质干细胞原代培养。8.2.5人羊膜间充质干细胞培养根据细胞的生长情况换液和传代。8.2.6人羊膜间充质干细胞冻存冻存细胞程序降温后置液氮中保存。8.2.7人羊膜间充质干细胞复苏取出冻存管进行快速融化、离心洗涤后进行培养。8.2.8人羊膜间充质干细胞溶液人羊膜间充质干细胞溶液应为均质状态，无絮状沉淀，细胞存活率≥90％。8.3关键质量属性8.3.1细胞形态细胞贴壁培养时呈纺锤形和梭形的成纤维细胞态，形态均一。8.3.2染色体核型正常核型应为46,XX或46,XY。8.3.3细胞存活率未冻存细胞存活率≥90%且冻存复苏后细胞存活率≥70%。8.3.4细胞标志蛋白CD105、CD73、CD90阳性率均≥95%；CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45、HLA-DR阳性率≤2%。8.3.5免疫调节经炎症因子（IFN-γ或者IFN-γ联合TNF-α）诱导后表达吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）。与T淋巴细胞共培养能抑制T淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ、TNF-α。8.3.6三系分化具有成骨、成脂和成软骨的分化潜能。8.3.7成瘤性免疫缺陷动物（如小鼠）体内成瘤试验结果为阴性。8.3.8微生物真菌、细菌、支原体、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP为阴性。8.4过程控制8.4.1扩增、冻存、复苏等过程控制应符合T/CSCB0009-2022要求。8.4.2细胞STR检测结果应与供体细胞保持一致。