【团体标准】 日化产品长效抑菌效果的评价方法

11抑菌效果试验11.1试样的接种每2片试样或2片对照样为一组，分别取2组对照样和1组试样，放置于3个空的无菌培养皿内，各滴加0.25mL试验菌悬液（9），要求试验菌悬液在试样和对照样上尽量铺展均匀。2组对照样分别用于接种后立即洗脱并测试，以及培养一段时间（t小时）后洗脱并测试；1组试样用于培养一段时间（t小时）后洗脱并测试。细菌培养时间t应不低于18h，同时接种后立即洗脱对照样的回收菌落数应在（1×104）CFU/组布～（9×104）CFU/组布范围。11.2立即洗脱用无菌镊子夹取刚刚接种细菌的1组对照样，投入到1个含10mL细菌洗脱液（7.8）的均质袋中，在拍打匀浆机内拍打1min，将细菌从载体上洗脱下来。如无拍打匀浆机，可将对照样转入含10mL细菌洗脱液（7.8）的100mL无菌三角瓶中，用手摇晃30s（摆幅约30cm），将细菌从载体上洗脱下来。实验室可根据实际情况调整细菌洗脱液（7.8）的用量至20mL。11.3接种试样继续培养与洗脱将放置有接种试验菌悬液载体的2个无菌培养皿（一个装有2片试样，一个装有2片对照样）盖上培养皿盖，用保鲜膜封口，以防载体上的液体蒸发。在合适的温度下于恒温恒湿培养箱（6.1）培养t小时。期间培养箱相对湿度应控制在85%以上，培养温度根据接种的细菌确定。培养结束后，将试样和对照样分别投入到含10mL细菌洗脱液的均质袋中，在拍打匀浆机内拍打1min，将细菌从载体上洗脱下来。如无拍打匀浆机，可将试样和对照样分别转入含10mL细菌洗脱液（7.8）的100mL无菌三角瓶中，用手摇晃30s（摆幅约30cm），将细菌从载体上洗脱下来。实验室可根据实际情况调整细菌洗脱液（7.8）的用量至20mL。11.4试样活菌数的测定用移液器移取1mL洗脱液（11.2或11.3），移入含9mLPBS（7.5）的试管内，充分振荡。从该试管中吸取1mL样液，注入另一含9mLPBS（7.5）的试管内充分振荡（或作适当稀释后，取其中2～3个稀释度的稀释液）。以此类推，对11.2和11.3的洗脱液分别做10倍梯度稀释。每移取一次，更换一次吸头。用移液器从系列稀释的各试管吸取1mL样液注入平皿内，再倒入约45℃的TSA培养基（7.3）15mL-20mL，盖好盖子，转动平皿，使其充分混匀，在室温下放置至凝固后，将平皿倒置，在生化培养箱（6.2）中培养48h，计数菌落数。培养温度根据接种的细菌确定。若接种低稀释度样液的平板无菌落生长，但接种高稀释度样液的平板有菌落生长，按无菌落生长计数。若不同稀释度平板间菌落数不成梯度，则以低稀释度平板菌落数计数。11.5平行试验按照11.1～11.4的实验步骤，重复操作3次。12结果计算和评价12.1实验有效性评价细菌增长值F按式（1）计算，当F大于或等于1.5时，当次试验判断为有效。F=lgCt-lgC0………………………………（1）式中：F——对照样的细菌增长值；Ct——对照样接种并培养t小时后测得的细菌数；C0——对照样接种后立即测得的细菌数。12.2抑菌率的计算抑菌率X按式（2）计算。………………………（2）Ct——对照样接种并培养t小时后测得的细菌数；Tt——试样接种并培养t小时后测得的细菌数。取三次测试平均值，结果保留一位小数。12.3结果的表达以抑菌率的计算值作为结果。当抑菌率计算值为负数时，表示为“0.0%”，当抑菌率计算值>99.9%时，表示为“>99.9%”。12.4长效抑菌效果的评价当抑菌率≥90%，样品有t小时长效抑菌效果。当抑菌率≥99%，样品有良好的t小时长效抑菌效果。