【团体标准】 咖啡中毒菌酚等3种农药残留量的测定液相色谱-质谱联用法

4方法原理咖啡中毒菌酚、戊硝酚和消螨酚3种农药用乙腈提取，提取液经固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱联用仪检测，外标法定量。5试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，所有试验用水均为GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯。5.1.2甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。5.1.3无水硫酸钠（Na2SO4，CAS号：7757-82-6）：650℃灼烧4h，贮存于干燥器中，冷却后备用。5.1.4乙酸铵（CH3COONH4，CAS号：631-61-8）：色谱纯。5.1.5氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。5.2溶液配制5.2.1乙腈-水溶液（20+80，体积比）：量取20mL乙腈加入80mL水中，混匀。5.2.25mmol乙酸铵水溶液5.3标准品毒菌酚（Hexachlorophene，C13H6Cl6O2，CAS：70-30-4)、戊硝酚（Dinosam，C11H14N2O5，CAS：4097-36-3)、消螨酚（Dinex，C12H14N2O5，CAS：131-89-5)，纯度均≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。5.4标准溶液配制5.4.1标准储备溶液（1000μg/mL）5.4.2混合标准储备溶液（10μg/mL)5.4.3混合标准溶液（1μg/mL)5.5材料5.5.1固相萃取小柱：规格6mL，填料（PSA：225mg；C18：90mg；EMRLipid：250mg；CarbonS：30mg）或相当者。5.5.2微孔滤膜（有机相）：13mm×0.22μm。6仪器6.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2电子天平：精确至0.001g。6.3离心机：转速不低于4200r/min。6.4涡旋混合器。6.5氮吹仪。6.6高速匀浆机。7试样制备及保存生咖啡豆样品在同一批次产品中随机抽取500g，粉碎后充分混匀，平均分两份置于聚乙烯瓶或袋中，两份样分别为测试样和备用样。测试样和备用样分别存放，于-18℃及以下条件保存。8.1试样前处理8.1.1试样提取：称取2g～5g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加入15mL乙腈，涡旋混匀，用高速匀浆机15000r/min匀浆2min，4200r/min离心5min。8.1.2试样净化：准确从离心管中吸取7mL8.1.1提取液至10mL干净试管中，加入700μL水后混匀，待净化。把5.5.1的固相萃取小柱放到架子上，下接10mL装有0.3g无水硫酸钠的试管，吸取待净化液3mL至固相萃取小柱中，让其在重力的作用下自然滴落到试管中，最后用洗耳球吹干固相萃取小柱。涡旋混匀试管中溶液，准确吸取2mL上清液至10mL干净的试管中，40℃水浴中氮吹至近干。用1mL乙腈-水溶液（5.2.1）定容，过0.22μm有机滤膜（5.5.2）装入样品瓶中，采用液相色谱串联质谱仪测定。8.2测定条件8.2.1液相色谱参考条件8.2.2质谱参考条件8.3基质标准工作溶液：选择与被测试样基质相同的空白试样按照8.1进行前处理，得到空白基质净化样。准确吸取10μL、20μL、40μL、80μL、100μL和200μL的混合标准溶液（5.4.3）至空白基质中，置于氮吹仪上，在常温下缓慢氮吹至净干，分别加入1mL乙腈-水溶液（5.2.1）定容，混匀后过0.22μm微孔有机滤膜（5.5.2）配制成浓度为10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、100ng/mL和200ng/mL系列基质匹配标准工作溶液，供液相色谱-质谱联用仪测定。以标准物质质量浓度为横坐标，相应响应峰面积为纵坐标，绘制基质匹配标准工作曲线。8.4定性和定量8.4.1保留时间定性：被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准物质色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。8.4.2离子丰度比定性：在相同实验条件下进行试样测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与基质标准溶液相一致，并且目标化合物选择的定性离子、定量离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，试样中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范围，则可判断试样中存在目标农药。8.4.3定量：外标法定量。8.5试样测定：将基质混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱-串联质谱仪中，以保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。8.6平行试验9结果计算10精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。11检出限和定量限本方法的毒菌酚、戊硝酚和消螨酚检出限：0.01mg/kg，定量限：0.04mg/kg。