4方法原理咖啡中毒菌酚、戊硝酚和消螨酚3种农药用乙腈提取，提取液经固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱联用仪检测，外标法定量。5试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，所有试验用水均为GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯。5.1.2甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。5.1.3无水硫酸钠（Na2SO4，CAS号：7757-82-6）：650℃灼烧4h，贮存于干燥器中，冷却后备用。5.1.4乙酸铵（CH3COONH4，CAS号：631-61-8）：色谱纯。5.1.5氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。5.2溶液配制5.2.1乙腈-水溶液（20+80，体积比）：量取20mL乙腈加入80mL水中，混匀。5.2.25mmol乙酸铵水溶液5.3标准品毒菌酚（Hexachlorophene，C13H6Cl6O2，CAS：70-30-4)、戊硝酚（Dinosam，C11H14N2O5，CAS：4097-36-3)、消螨酚（Dinex，C12H14N2O5，CAS：131-89-5)，纯度均≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。5.4标准溶液配制5.4.1标准储备溶液（1000μg/mL）5.4.2混合标准储备溶液（10μg/mL)5.4.3混合标准溶液（1μg/mL)5.5材料5.5.1固相萃取小柱：规格6mL，填料（PSA：225mg；C18：90mg；EMRLipid：250mg；CarbonS：30mg）或相当者。5.5.2微孔滤膜（有机相）：13mm×0.22μm。6仪器6.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2电子天平：精确至0.001g。6.3离心机：转速不低于4200r/min。6.4涡旋混合器。6.5氮吹仪。6.6高速匀浆机。7试样制备及保存生咖啡豆样品在同一批次产品中随机抽取500g，粉碎后充分混匀，平均分两份置于聚乙烯瓶或袋中，两份样分别为测试样和备用样。测试样和备用样分别存放，于-18℃及以下条件保存。8.1试样前处理8.1.1试样提取：称取2g～5g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加入15mL乙腈，涡旋混匀，用高速匀浆机15000r/min匀浆2min，4200r/min离心5min。8.1.2试样净化：准确从离心管中吸取7mL8.1.1提取液至10mL干净试管中，加入700μL水后混匀，待净化。把5.5.1的固相萃取小柱放到架子上，下接10mL装有0.3g无水硫酸钠的试管，吸取待净化液3mL至固相萃取小柱中，让其在重力的作用下自然滴落到试管中，最后用洗耳球吹干固相萃取小柱。涡旋混匀试管中溶液，准确吸取2mL上清液至10mL干净的试管中，40℃水浴中氮吹至近干。用1mL乙腈-水溶液（5.2.1）定容，过0.22μm有机滤膜（5.5.2）装入样品瓶中，采用液相色谱串联质谱仪测定。8.2测定条件8.2.1液相色谱参考条件8.2.2质谱参考条件8.3基质标准工作溶液：选择与被测试样基质相同的空白试样按照8.1进行前处理，得到空白基质净化样。准确吸取10μL、20μL、40μL、80μL、100μL和200μL的混合标准溶液（5.4.3）至空白基质中，置于氮吹仪上，在常温下缓慢氮吹至净干，分别加入1mL乙腈-水溶液（5.2.1）定容，混匀后过0.22μm微孔有机滤膜（5.5.2）配制成浓度为10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、100ng/mL和200ng/mL系列基质匹配标准工作溶液，供液相色谱-质谱联用仪测定。以标准物质质量浓度为横坐标，相应响应峰面积为纵坐标，绘制基质匹配标准工作曲线。8.4定性和定量8.4.1保留时间定性：被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准物质色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。8.4.2离子丰度比定性：在相同实验条件下进行试样测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与基质标准溶液相一致，并且目标化合物选择的定性离子、定量离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，试样中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范围，则可判断试样中存在目标农药。8.4.3定量：外标法定量。8.5试样测定：将基质混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱-串联质谱仪中，以保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。8.6平行试验9结果计算10精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。11检出限和定量限本方法的毒菌酚、戊硝酚和消螨酚检出限：0.01mg/kg，定量限：0.04mg/kg。

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本文件规定了普洱咖啡主要病虫为害特点和发生规律、防控原则和措施、主要病害防控技术、主要虫害防控技术。本文件适用于普洱咖啡主要病虫害生态综合防控

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1范围本文件规定了生咖啡中溴甲烷残留量的顶空/气相色谱质谱法。本文件适用于生咖啡中溴甲烷残留量的测定。2规范性引用文件3术语和定义4原理将样品置于密封的顶空瓶中，在70℃经过30min的平衡，溴甲烷在气固两相中达到动态的平衡，吸取顶空瓶内气体注入气相色谱-质谱联用仪进行检测，以外标法进行定量。5试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，所有试验用水均为GB/T6682规定的一级水。5.1试剂甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。5.2标准品溴甲烷（MethylBromide，CH3Br，CAS号：74-83-9）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。5.3标准溶液配制5.3.1溴甲烷标准储备液(100.0μg/mL)：准确移取适量溴甲烷标准溶液，置于10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀，将标准溶液转移至棕色玻璃容器内，-18℃避光保存，保存期3个月。5.3.2溴甲烷标准使用液：分别准确吸取100μg/mL溴甲烷标准储备液200μL、400μL、600μL、800μL、1000μL于10mL容量瓶中，用甲醇定容、摇匀，得浓度为2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL的标准系列溶液，该溶液在﹣18℃条件下可保存一周。6仪器和设备6.1气相色谱质谱联用仪，带顶空装置。6.2电子天平（精确至0.1mg）。6.3涡旋混合器。7试样制备及保存将试样置于-18℃冰箱中冷冻存储4h以上，取试样于容器内倒入液氮后捣碎或采用冷冻粉碎机粉碎，制备成均匀试样，装入洁净的容器，密封并做好标识。试样于-18℃冷冻保存，备用。8分析步骤8.1样品前处理准确称取样品5g（精确至0.1mg）（干性样品称取2.5g）于20mL顶空瓶中，立即盖紧瓶盖。8.2仪器参考条件8.2.1顶空进样器条件8.2.2气相色谱-质谱条件8.2.3质谱仪条件8.3标准使用液顶空处理分别移取5mL一级水于20mL顶空瓶中，准确吸取5.3.2中各标准溶液使用液50μL至20mL顶空瓶中，立即盖紧瓶盖。各顶空瓶中溴甲烷的浓度系列：100ng、200ng、300ng、400ng、500ng，将溴甲烷标准系列工作溶液按浓度由低到高的顺序注入顶空-气相色谱质谱仪中，以标准系列工作样中溴甲烷的质量为横坐标，以溴甲烷的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。8.4定性和定量8.4.1保留时间被测试样中溴甲烷色谱峰的保留时间与标准溶液色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。8.4.2相对丰度比定性8.4.3定量8.5空白实验8.6平行试验9分析结果的表述10重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。11检出限和定量限本方法的检出限：0.005mg/kg，定量限：0.02mg/kg。

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4方法原理试样用乙腈提取，提取液经固相萃取小柱净化，气相色谱-质谱联用仪检测，内标法定量。5材料和试剂除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，所有试验用水均为GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1丙酮（CH3COCH3，CAS号：67-64-1）：色谱纯。5.1.2正己烷（C6H14，CAS号：110-54-3）：色谱纯。5.1.3乙腈（C2H3N，CAS号：75-05-8）。5.1.4氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。5.1.5冰醋酸（CH3COOH，CAS号：64-19-7)。5.1.6无水硫酸钠（Na2SO4，CAS号：7757-82-6）：650℃灼烧4h，贮存于干燥器中，冷却后备用。5.2溶液配制5.2.1乙腈-醋酸溶液（99+1，体积比）：量取10mL冰醋酸加入990mL乙腈中，混匀。5.3标准品草枯醚（Chlornitrofen，C12H6Cl3NO3，CAS号：1836-77-7），纯度≥99.0%；二溴磷（Naled，C4H7Br2Cl2O4P，CAS号：300-76-5），纯度≥99.0%；氟吡甲禾灵（Haloxyfop-methyl，C16H13ClF3NO4，CAS号：69806-40-2），格螨酯（2,4-dichlorophenylbenzenesulfonate，C12H8CL2O3S，CAS号：97-16-5），纯度≥99.0%；氟除草醚（Fluoronitrofen，C12H6Cl2FNO3，CAS号：13738-63-1），纯度≥99.0%；烯虫炔酯（Kinoprene，C18H28O2，CAS号：42588-37-4），纯度≥99.0%；烯虫乙酯（Hydroprene，C17H30O2，CAS号：65733-18-8），纯度≥99.0%；环氧七氯B（Heptachlorepoxide，C10H5Cl7O，CAS号：1024-57-3），纯度≥99.0%；或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。5.4标准溶液配制5.4.1标准储备溶液（1000μg/mL）5.4.2混合标准储备液（10μg/mL)5.4.3混合标准溶液（1μg/mL)5.4.4内标溶液：准确称取约10mg环氧七氯B（精确至0.1mg）用正己烷溶解后转移至10mL容量瓶中，定容混匀为内标储备液。内标储备溶液用正己烷稀释至5μg/mL作为内标溶液。5.4.5校准曲线工作溶液：准确移取25μL、50μL、250μL、500μL、2500μL的5.4.3中1.0μg/mL的标准使用液至5mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀，得浓度为0.005μg/mL、0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL的标准曲线工作溶液。5.5材料5.5.1固相萃取小柱：规格6mL，填料（PSA：225mg；C18：90mg；EMRLipid：250mg；CarbonS：30mg）或相当者。5.5.2微孔滤膜（有机相）：13mm×0.22μm。6仪器6.1气相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有电子轰击源（EI）。6.2电子天平：精确至0.1mg和0.001g。6.3高速匀浆机：转速不低于15000r/min。6.4离心机：转速不低于4200r/min。6.5氮吹仪：30℃～60℃范围内可控温。6.6涡旋混合器。6.7超声波仪。7试样制备及保存生咖啡样品在同一批次产品中随机抽取500g，粉碎后充分混匀，平均分两份置于聚乙烯瓶或袋中，两份样分别为测试样和备用样。测试样和备用样分别存放，于-18℃及以下条件保存。8分析步骤8.1试样前处理8.1.1试样提取称取2g～5g试样（精确至0.001g）于100mL塑料离心管中，加10mL水涡旋混匀，静置30min。加入20mL乙腈-醋酸溶液（5.2.1），用高速匀浆机15000r/min匀浆2min，加入5g～7g氯化钠剧烈振荡数次，4200r/min离心5min，吸取7mL上清液至10mL试管中，加入700μL水混匀，待净化。8.1.2试样净化把5.5.1的固相萃取小柱放到架子上，下接10mL装有0.3g无水硫酸钠的干净试管，吸取8.1.1提取溶液3mL至小柱中，让其在重力的作用下自然滴落到试管中，最后用洗耳球吹干固相萃取小柱。旋涡混匀试管中的溶液，准确吸取2mL上清液至10mL干净的试管中，40℃水浴中氮吹至近干。加入20μL，5μg/mL环氧七氯B内标溶液（5.4.4），加入1mL正己烷复溶，过微孔滤膜（5.5.2），上机测定。8.2测定条件8.2.1气相色谱仪测定参考条件8.2.2质谱测定参考条件8.3基质标准工作溶液选择与被测试样接近的空白基质，按照8.1完成试样前处理，得空白基质溶液，置于氮吹仪上，在常温下缓慢氮吹至近干，加入20μL，5μg/mL环氧七氯B内标溶液（5.4.4），分别加入1mL5.4.5的校准曲线工作溶液复溶，过微孔滤膜（5.5.2）配制成系列基质匹配标准工作溶液，供气相色谱-质谱联用仪测定。以农药定量离子峰面积和内标物定量离子峰面积的比值为纵坐标，农药标准溶液质量浓度和内标物质量浓度的比值为横坐标，绘制基质匹配标准工作曲线。8.4定性和定量8.4.1保留时间定性被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。8.4.2相对丰度比定性在相同实验条件下进行试样测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准溶液相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的定性离子、定量离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，试样中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过下表2规定的范围，则可判断试样中存在目标农药。8.4.3定量内标法定量。8.5试样测定将基质混合标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱-串联质谱仪中，以保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。8.6平行试验9结果计算10精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。11检出限和定量限本方法的二溴磷、烯虫乙酯、烯虫炔酯、氟吡甲禾灵、格螨酯、氟除草醚、草枯醚的检出限：0.0025mg/kg，定量限：0.01mg/kg。

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