利用柱过载临界点的多级液相色谱分离化合物,采用三级高效液相色谱分离,(一)新鲜苦瓜茎叶干燥,研磨成粉;(二)100%甲醇对苦瓜茎叶干粉进行浸提24h,甲醇与苦瓜茎叶干粉的用量比为1:5~10(g:mL)。浸提液过滤浓缩,得到粗提物;(三)对粗提物进行一级高效液相色谱分离,分别收集18~26min时间段和30~42min时间段的流出液,浓缩,即得一级分离物1和一级分离物2;(四)分别对一级分离物1和一级分离物2进行二级高效液相色谱分离,对于一级分离物1分别收18~22min时间段和24~26min时间段的流出液,干燥浓缩,得二级分离物1-1和二级分离物1-2,对于一级分离物2收集33~37min时间段的流出液,干燥浓缩,得二级分离物2-1;(五)分别对二级分离物1-1、二级分离物1-2、二级分离物2-1进行三级高效液相色谱分离,分别收集20~24min时间段、23~26min时间段以及34~37min时间段的流出液,干燥浓缩,分别得到苦瓜素Ⅱ、苦瓜素L和苦瓜素Ⅰ。(六)高效液相色谱分离的的参数为:流动相为80%甲醇、柱温度为28℃、流速为2.5mL/min、分离柱为AgilentXB-C18、检测波长为210nm。获得了纯度达99%以上的苦瓜素类化合物,产率比以前的提取方法提高了100%,时间缩短为50h,大大缩短高效液相色谱分离所需的总时间,提纯过程耗时短、效率高,能定向高效大量地提纯制备高纯度的苦瓜素类化合物。
针对我国水环境中激素类化学污染物环境风险管理需求,综合考虑单一激素类化学污染物对地表水污染程度以及水环境中水生生物不同的毒性效应,例如污染物的暴露浓度水平、生长/发育、繁殖毒性效应等,重点围绕地表水暴露评估中数据筛选、毒性效应评估中筛选敏感受试生物、敏感测试终点等关键因素、毒性影响途径以及数据收集、数据处理、数据校核等环节,研究基于水环境中单一激素类化学污染物浓度水平、效应以及风险程度,建立水生态风险评估方法,根据污染物的影响途径、可获取的毒性数据数量和水生生物的物种数量,选择恰当推导预测无效应浓度的方法,客观描述水环境中激素类污染物的风险大小。具体内容包括:(1)范围;(2)规范性引用文件;(3)术语和定义;(4)生态风险评估原则;(5)风险评估程序;(6)风险评估方法;(7)不确定性分析;(8)风险管理;(9)附录A生态毒性数据筛选与评价;(10)附录BSSD模型
6筛选评估的原则和程序6.1筛选评估的原则潜在替代品筛选评估宜遵循以下原则:a)科学性:针对同一终点存在多个数据时,通过数据质量分析,选取高质量最佳可用数据,并结合证据权重进行危害识别;b)客观性:评估方法和数据信息具有透明性与客观性;c)灵活性:可根据筛选评估的目标需求,灵活选择评估的层级、数据的类型与覆盖面;并且随着对潜在替代品认识的不断深入,进行迭代评估。6.2筛选评估技术路线筛选评估分为一个准备阶段(T0)和三个层级(见图1);三个层级的筛选评估差异主要体现在筛选评估数据集的数据来源。一般情况下,T1基于包括非测试数据在内的现有数据,T2基于T1数据基础上增加高通量筛选性测试,T3基于T1和T2基础上增加经典生物测试。收集各层级数据后,对照附录A和附录B进行PBT特性评估,如不满足评估需求,进行下一个层级的数据获取与评估。也可根据评估需求方的工作设计和数据有效性,可跳跃式执行各层级(T1~T3)筛选程序,如完成T1中的现有数据收集与评估,直接进行T3层级测试与评估。当筛选评估结果具有较大的不确定时,可根据需要,开展迭代评估。