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本文件规定了核酸靶序列定量方法的性能评估和质量保证的通用要求。本文件适用于数字PCR(dPCR)或实时定量PCR(qPCR)扩增技术对DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)靶序列的定量测定。适用的靶序列核酸分子，包括双链DNA(dsDNA)，如基因组DNA(gDNA)和质粒DNA；单链DNA(ssDNA)，互补DNA(cDNA)，单链RNA(ssRNA)包括核糖体RNA(rRNA)、信使RNA(mRNA)；双链RNA，包括长链和短链非编码RNA［微小RNA(miRNA)和小干扰RNA(siRNA)等］。本文件适用于生物来源的核酸(如病毒、原核细胞和真核细胞)、无细胞生物液体样本(如血浆或细胞基质)；体外非生物来源的核酸［如寡核苷酸、合成的基因片段和体外转录(IVT)的RNA］中提取的核酸。本文件不适用于过短的DNA寡核苷酸(＜50碱基)的定量。本文件包含：--分析设计，包括定量策略(qPCR标准曲线法、dPCR分子计数法、qPCR相对定量法、dPCR比值定量法)和使用控制；--总核酸质量浓度定量和核酸样本质量控制，包括核酸质量的评估(纯度和完整性)；--PCR试验设计、优化，生物信息学和体外特异性测试；--数据质量控制和分析，包括验收标准、阈值设置以及归一化方法；--根据qPCR/dPCR具体要求的方法验证(精密度、线性、定量限、检出限、正确度和稳健性)；--计量溯源性建立和测量不确定度评估的方法。本文件不对生物材料的抽样或生物样本的处理过程(如采集、保存、运输、储存、处理和核酸提取)提出要求或验收标准。也不对特殊应用(如可能出现特殊基质问题的食品或者临床应用领域)提出要求和验收标准。
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This standard specifies digital PCR quantitative detection methods for genetically modified plants.
This standard is applicable to the quantitative detection of seed components of genetically modified corn event MON810, event MON89034,event MIR162 and genetically modified soybean event GTS 40-3-2,genetically modified rice event kemingdao, genetically modified cotton event GHB119, and genetically modified rapeseed event RT73 by digital PCR.
The quantitative detection limit of this method is 0.1% (mass fraction).
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